Massiomo Ambrosini (født 29. maj 1977 i Pesaro, Italien) er en italiensk fodboldspiller, der spiller på midtbanen for den italienske Serie A-klub AC Milan, hvor han er anfører. Han er på kontrakt i klubben indtil sommeren 2012. Han har bl.a. vundet to UEFA Champions League trofæer og fire Serie A titler med AC Milan.
Siden han fik sit gennembrud for AC Milan i sæsonen 1998/1999 har han været en vigtig del af holdet, selvom han har ofte har været skadesramt. Hver gang han er kommet tilbage, har han formået at tilspille sig en fast plads på midtbanen.
